【摘要】目的：分析食品中空腸彎曲菌定量檢測結(jié)果的不確定度評定。方法：根據(jù)《國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評估中心2019年國家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測工作手冊》展開樣本測定，由JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》探究不確定度來源，并計(jì)算不確定度各分量，分析食品中空腸彎曲菌定量檢測結(jié)果的不確定度評定。結(jié)果：電子天平、玻璃量器、移液器、重復(fù)檢測相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.0011545、0.0057733、0.0034640、0.01739965;平板計(jì)數(shù)方式合成不確定度、拓展不確定度為0.01869263、0.0373852。結(jié)論：通過逐一評定電子天平、玻璃量器、移液器、樣本重復(fù)檢測等產(chǎn)生的不確定度可對食品中空場彎曲菌不確定度作出有效估測，對提高檢驗(yàn)結(jié)果有效性具有積極作用。

　　【關(guān)鍵詞】樣本重復(fù)檢測;玻璃量器;評估不確定度

　　空腸彎曲菌菌體輕度彎曲與逗點(diǎn)狀相似，長1.5-5um，寬0.2-0.8um。菌體一端、兩端有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑。抵抗力較弱，易為干燥、直射日光、弱消毒劑殺滅[1-2]。為牛、羊、狗及多種禽類寄居菌。可使蔬菜、水果、多種熟食、牛奶等受到此菌污染，導(dǎo)致人類中毒。為一種人畜共患病病菌，導(dǎo)致人、動(dòng)物發(fā)生多種疾病，且是食物性病原菌，認(rèn)為與全世界人類細(xì)菌性腹瀉有較大關(guān)聯(lián)。測量不確定度在一定程度上反映測量結(jié)果的質(zhì)量，不確定度越小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與真實(shí)值越接近。本研究通過樣品測定探究不確定度來源，如下文。

　　1資料與方法

　　1.1一般資料

　　根據(jù)《國家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評估中心2019年國家食品污染和有害因素風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測工作手冊》展開樣本測定，由JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》探究不確定度來源，并計(jì)算不確定度各分量。

　　1.2方法

　　根據(jù)有關(guān)彎曲菌檢驗(yàn)操作程序第二法平板計(jì)數(shù)方式展開彎曲菌檢測，選取空腸彎曲菌標(biāo)準(zhǔn)菌株菌懸液加入適量空腸彎曲菌陰性禽胴體內(nèi)，倒入適量蛋白胨水后放在一定速度的振蕩器上振蕩15min，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作要求將禽胴體取出，余下液體為待測液樣本原液。使用合適移液器吸取適量待測原液倒入適量生理鹽水內(nèi)，搖晃確定混合充分，得到第一份具有一定比例的勻液。將得到的具有一定比例的勻液再加入適量生理鹽水，重復(fù)以上步驟，再次得到一定比例的勻液。

　　在制備樣本勻液過程中，每進(jìn)行一次遞增稀釋，需更換一次無菌吸頭。選2個(gè)稀釋度合適的樣本勻液，每份樣本勻液稀釋度為100uL，迅速涂布在選擇性瓊脂平板上，在每個(gè)稀釋度進(jìn)行平行接種。放于合適條件下，培養(yǎng)48h。在可疑菌落數(shù)在15-150CFU/板的稀釋度相同的兩塊平板上選取不少于5個(gè)菌落，在選取的菌落上，劃線接種哥倫比亞血瓊脂展開純培養(yǎng)，培養(yǎng)條件同之前。

　　1.3臨床評價(jià)

　　觀察電子天平、玻璃量器、移液器等樣品稱量、重復(fù)性檢驗(yàn)、食品中空腸彎曲菌平板計(jì)數(shù)方式合成不確定度、拓展不確定度等實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果。

　　結(jié)果

　　2.1樣品稱量不確定度評定

　　電子天平、玻璃量器、移液器不確定引入：經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)使用電子天平稱量1000g樣品共需稱量2次，不確定引入：標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.2886750;相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.0011545。：經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)使用玻璃量器量取500ml緩沖蛋白胨，根據(jù)量筒允許最大誤差，不確定引入：標(biāo)準(zhǔn)不確定度=2.8867511;相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.0057733。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)使用移液器倍比稀釋2次、加樣4次，不確定引入：標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.5773501;相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度=0.0034640。

　　2.2樣本重復(fù)檢測不確定度引入

　　經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)urel(重復(fù)檢測)=0.01739965。

　　2.3食品中空腸彎曲菌平板計(jì)數(shù)方式合成不確定度、拓展不確定度

　　經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，合成不確定度需綜合電子天平、玻璃量器、移液器及重復(fù)檢測的不確定度結(jié)果，得到此次實(shí)驗(yàn)的U(合成)=0.01869263;選取置信概率P為95%，確定包含因子K為2 ，計(jì)算拓展不確定度，得到此次實(shí)驗(yàn)的拓展不確定度(U95rel)=0.0373852。

　　食品論文投稿期刊：《食品安全導(dǎo)刊》雜志是由中國商業(yè)聯(lián)合會(huì)主管，中國商業(yè)股份制企業(yè)經(jīng)濟(jì)聯(lián)合會(huì)及北京肉類食品協(xié)會(huì)聯(lián)合主辦，是國家新聞出版總署正式批準(zhǔn)的一本全面關(guān)注食品安全政策、標(biāo)準(zhǔn)、技術(shù)、信息的行業(yè)期刊。

　　3討論

　　不確定度來源在微生物檢測中較分散，與實(shí)驗(yàn)使用試劑質(zhì)量、設(shè)備、環(huán)境等因素均有聯(lián)系。本次實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵照相關(guān)彎曲菌檢驗(yàn)流程進(jìn)行操作，選用人工污染樣本，可將“基質(zhì)”對檢測結(jié)果的影響忽視[3]。對使用的試劑、培養(yǎng)基等都展開了質(zhì)量控制，對添加、沒有添加陽性菌株的樣本進(jìn)行對比分析，監(jiān)控實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境，對實(shí)驗(yàn)使用的高壓滅菌器、移動(dòng)紫外車及微需氧工作站等儀器設(shè)備都進(jìn)行檢驗(yàn)，確保合格后進(jìn)行使用。

　　本研究電子天平、玻璃量器、移液器、重復(fù)檢測相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度0.0011545、0.0057733、0.0034640、0.01739965;平板計(jì)數(shù)方式合成不確定度、拓展不確定度為0.01869263、0.0373852。提示重復(fù)檢測對合成不確定度貢獻(xiàn)高于電子天平、玻璃量器、移液器，玻璃量器對合成不確定度貢獻(xiàn)次于重復(fù)檢測，電子天平、移液器對合成不確定度貢獻(xiàn)較低。

　　表明微生物實(shí)驗(yàn)使用的試劑、相關(guān)儀器設(shè)備及檢驗(yàn)人員操作步驟等均會(huì)對微生物實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果有效性參數(shù)一定程度影響。通過了解對微生物實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)施過程中進(jìn)行對應(yīng)質(zhì)量控制，減少微生物實(shí)驗(yàn)使用的試劑、相關(guān)儀器設(shè)備及檢驗(yàn)人員操作步驟等對檢驗(yàn)結(jié)果的影響，提高微生物實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、有效性。

　　綜上所述，通過逐一評定電子天平、玻璃量器、移液器、樣本重復(fù)檢測等產(chǎn)生的不確定度可對食品中空場彎曲菌不確定度作出有效估測，對提高檢驗(yàn)結(jié)果有效性具有積極作用。

　　參考文獻(xiàn)：

　　[1]熊素平, 聶晶晶, 陳凱,等. 食品中空腸彎曲菌定量檢測結(jié)果的不確定度評定[J]. 醫(yī)藥論壇雜志, 2019, 40(10):111-114.

　　[2]彭志蘭, 林吉恒, 黃朱梁,等. 基質(zhì)輔助激光解析電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜法快速鑒定餐飲食品中的空腸彎曲菌[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào), 2020, 11(09):292-297.

　　[3]申進(jìn)玲, 趙麗娜, 蔣原,等. 含內(nèi)標(biāo)的多重實(shí)時(shí)PCR法同時(shí)檢測空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào), 2019, 10(07):110-118.

　　作者：張粉娥 1 郭強(qiáng) 2