摘要：為了全面、準(zhǔn)確地評價四川省主栽辣椒品種對疫病的抗性水平，采用室內(nèi)苗期接種(6～8片真葉期)、移栽大田后接種(分枝期)和病圃試驗(yàn)(結(jié)果期)3種方法對四川省主栽的56個辣椒品種進(jìn)行疫病抗性鑒定。結(jié)果表明，5個辣椒品種采用3種鑒定方法均對疫病具有抗性，18個品種均表現(xiàn)為感病，其余品種由于接種時期和栽培環(huán)境不同抗性類型發(fā)生變化;相關(guān)性分析結(jié)果表明，室內(nèi)苗期人工接種能更準(zhǔn)確地反映辣椒在田間的真實(shí)抗性水平。

　　關(guān)鍵詞：辣椒品種;疫病;抗性鑒定

　　辣椒是四川省重要的經(jīng)濟(jì)作物，2017年全省種植面積超過8.7萬hm2(130萬畝)。由辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici)引起的辣椒疫病是一種普遍發(fā)生的真菌性土傳病害，其傳播方式多樣、發(fā)病迅速，嚴(yán)重影響辣椒的產(chǎn)量和品質(zhì)。

　　目前，施用化學(xué)藥劑是防治辣椒疫病的主要途徑，由于辣椒疫病突發(fā)性強(qiáng)，化學(xué)防治效果不明顯，而且長期施用化學(xué)農(nóng)藥容易導(dǎo)致病原菌抗藥性的產(chǎn)生，因此，篩選抗性種質(zhì)資源和培育抗病品種是解決這一問題的最安全有效的手段之一。國內(nèi)外關(guān)于辣椒對疫病的抗性鑒定研究較多(李林等，2001;楊學(xué)輝等，2006;Candoleetal.，2010;關(guān)天舒等，2011;譚清群等，2014;何烈干等，2017)，篩選出大量的抗病種質(zhì)資源，并選育出對疫病具有良好抗性的品種(易圖永和謝丙炎，2002)。

　　隨著種植年限的延長，辣椒抗病性會隨著病原菌致病力的增強(qiáng)而下降或喪失，對辣椒主栽品種疫病抗性的持續(xù)監(jiān)測可以為辣椒抗病育種工作和品種的合理布局提供數(shù)據(jù)支撐。四川省是辣椒種植和消費(fèi)大省，但目前對辣椒疫病的抗性研究較少，本文收集了四川省主栽的辣椒品種56個，通過室內(nèi)苗期接種(6～8片真葉期)、移栽大田后接種(分枝期)以及病圃自然發(fā)病(結(jié)果期)3種方法來綜合評價供試?yán)苯菲贩N對疫病的抗性水平，為四川省辣椒品種的引進(jìn)、更替、抗病育種和病害防治提供理論依據(jù)。

　　1材料與方法

　　1.1試驗(yàn)材料

　　辣椒品種：收集近年來四川省主栽的辣椒品種56個，其中線椒28個，牛角椒13個，羊角椒11個，燈籠椒3個，朝天椒1個(表1)。病原菌：菌株LJYM1分離自四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院郫縣試驗(yàn)基地。培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(potatodextroseagar，PDA)(土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂12g，補(bǔ)足水至1L);V8果汁培養(yǎng)基(V8果汁100mL，CaCO30.2g，瓊脂12g，補(bǔ)足水至1L)。

　　1.2試驗(yàn)方法

　　1.2.1孢子懸浮液的制備

　　將保存于石蠟油中的辣椒疫霉菌接種于PDA平板上活化，然后轉(zhuǎn)接至V8培養(yǎng)基上，26℃黑暗條件培養(yǎng)4d后轉(zhuǎn)移至光照條件下誘導(dǎo)產(chǎn)孢，待氣生菌絲上出現(xiàn)大量淺粉色粉狀顆粒后，使用冰水將菌絲和孢子囊洗脫下來，兩層紗布過濾，濾液轉(zhuǎn)至4℃冰箱30min，然后在室溫條件下放置30min以促進(jìn)游動孢子釋放，使用血球計數(shù)板定量并將孢子懸浮液濃度調(diào)至1.0×104個·mL-1。

　　1.2.2辣椒品種室內(nèi)苗期人工接種抗性鑒定

　　試驗(yàn)于2017年4～6月在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所溫室中進(jìn)行，使用5%NaClO對辣椒種子進(jìn)行消毒處理，洗凈后放于50℃溫水中浸種30min，室溫黑暗保濕催芽，待種子露白后播種于裝有無菌基質(zhì)的塑料杯中，每個品種保證有30株苗。

　　當(dāng)幼苗長至6～8片真葉時，使用孢子懸浮液灌根法進(jìn)行接種(李智軍等，2007)。接種前澆足水，在距莖基部3cm處使用玻璃棒扎1個深約3cm的孔，使用移液槍將5mL孢子懸浮液注入孔內(nèi)，接種后放于白天溫度24～28℃、夜間20～22℃的溫室中，每天保持飽和的土壤濕度。

　　于接種后4d進(jìn)行病害調(diào)查，計算發(fā)病率和病情指數(shù)。辣椒疫病的病情分級標(biāo)準(zhǔn)參考譚清群等(2014)的標(biāo)準(zhǔn)：0級，無癥狀;1級，個別葉片輕微萎蔫;3級，半數(shù)以下葉片萎蔫，下部少數(shù)葉片脫落;5級，半數(shù)以上葉片萎蔫、落葉明顯;7級，幼苗根莖部變黑縊縮，除生長點(diǎn)外其余葉片全部萎蔫、脫落;9級，葉片全部萎蔫或植株枯死。抗性劃分標(biāo)準(zhǔn)參考毛愛軍等(1997)的標(biāo)準(zhǔn)：0≤病情指數(shù)≤10，高抗(HR);10<病情指數(shù)≤30，抗病(R);30<病情指數(shù)≤50，中抗(MR);病情指數(shù)>50，感病(S)。

　　1.2.3辣椒品種大田人工接種抗性鑒定

　　于2017年5～6月在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院新都農(nóng)場進(jìn)行試驗(yàn)。辣椒種子催芽方法同1.2.2，種子露白后播種于50孔穴盤中育苗，待幼苗長至6～8片真葉時進(jìn)行移栽，覆膜高畦栽培，株距0.30m，行距0.45m，每個品種約60株，常規(guī)水肥管理。移栽后16d使用1.2.2的方法接種，每株接種10mL孢子懸浮液，于接種后8d和13d進(jìn)行病害調(diào)查，計算病情指數(shù)。

　　病情分級標(biāo)準(zhǔn)和抗性劃分標(biāo)準(zhǔn)參考毛愛軍等(1997)：0級，無病癥;1級，幼苗根莖部輕微變黑，葉片不萎蔫或可恢復(fù)性萎蔫;3級，幼苗根莖部變黑達(dá)1～2cm，葉片不可恢復(fù)性萎蔫，下部葉片偶有脫落;5級，幼苗根莖部變黑超過2cm，葉片明顯萎蔫或落葉明顯;7級，幼苗根莖部變黑縊縮，除生長點(diǎn)外全部落葉或植株萎蔫;9級，整株枯死。

　　1.2.4辣椒品種田間抗性調(diào)查

　　于2017年5～8月在四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院郫都試驗(yàn)基地進(jìn)行試驗(yàn)，病圃內(nèi)辣椒疫病常年發(fā)生，以此來模擬田間自然發(fā)病情況。辣椒的栽培管理同1.2.3，每個品種20株，設(shè)3次重復(fù)，在辣椒結(jié)果期進(jìn)行病害調(diào)查。病害分級標(biāo)準(zhǔn)參考農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則：0級，健康無癥狀;1級，地上部僅葉、果有病斑;3級，地上莖、枝有褐腐斑;5級，莖基部有褐腐斑;7級，地上莖、枝與莖基部均有褐腐斑，并且部分枝條枯死;9級，全株枯死。

　　1.3數(shù)據(jù)分析

　　使用SPSS19.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行K-均值聚類分析和相關(guān)性分析。

　　2結(jié)果與分析

　　2.1辣椒品種室內(nèi)苗期人工接種抗性鑒定

　　接種4d后，參試56個辣椒品種的病情指數(shù)為11.11～81.11，其中抗病品種5個，分別為27、36、54、56、58號，占8.93%;中抗品種10個，占17.86%;其余41個品種均為感病，占73.21%;無高抗品種。

　　2.2辣椒品種大田人工接種抗性鑒定

　　田間人工接種試驗(yàn)中，35、38號移栽后成活株數(shù)太少，故未進(jìn)行統(tǒng)計，其余54個品種接種13d后，病情指數(shù)為0～98.69。表現(xiàn)高抗的品種有7個，其中50、56、68號病情指數(shù)為0;表現(xiàn)抗病和中抗的品種分別為9個和10個;其余28個品種均表現(xiàn)為感病。

　　與室內(nèi)苗期接種結(jié)果相比，有29個品種抗性類型發(fā)生變化，其中有6個品種由抗病或中抗變?yōu)楦胁�，其�?3個品種在田間接種后抗性水平明顯提高，包括15個品種由感病變?yōu)橹锌够蚩共。?個品種(46號和55號)由感病變?yōu)楦呖梗?個品種(36號和56號)由抗病變?yōu)楦呖梗?個品種(13、50、68號)由中抗變?yōu)楦呖梗?個品種(59號)由中抗變?yōu)榭共　?/p>

　　2.3辣椒品種田間抗性鑒定

　　田間病圃的抗性鑒定中，有8個品種移栽后成活株數(shù)太少，故未進(jìn)行統(tǒng)計，選取48個辣椒品種在結(jié)果期進(jìn)行病害調(diào)查，參試品種的平均病情指數(shù)為27.00～100.00。使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行K-均值聚類分析，將參試品種分為3類，病情指數(shù)在27.00～45.59之間的為類型1，植株較為抗病，共7個品種，其中13、36、50、56、68號品種使用3種評價方法均對疫病具有抗性。

　　病情指數(shù)在55.64～81.39之間的為類型2，植株表現(xiàn)為感病，共17個品種，其中54號和58號品種室內(nèi)和大田人工接種抗性鑒定均表現(xiàn)為抗病;其余24個品種病情指數(shù)均超過83.20，為類型3，植株大部分死亡，其中59號品種室內(nèi)和大田人工接種抗性鑒定表現(xiàn)為抗病或中抗。

　　2.43種抗性鑒定方法的相關(guān)性分析

　　使用SPSS軟件對3種方法的鑒定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，3種方法的鑒定結(jié)果之間均呈極顯著正相關(guān)。與大田接種方法相比，室內(nèi)苗期人工接種的鑒定結(jié)果能更準(zhǔn)確地反映該品種在田間的真實(shí)抗性水平。

　　3結(jié)論與討論

　　本試驗(yàn)采用室內(nèi)苗期接種、移栽大田后接種以及病圃試驗(yàn)3種抗性鑒定方法，分別對應(yīng)辣椒的幼苗期、分枝期和結(jié)果期來綜合評價辣椒對疫病的抗性。通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)和抗性類型的比較，有23個品種在幼苗期、分枝期和結(jié)果期對疫病的抗感性穩(wěn)定，包括昆椒王1號、精細(xì)185、新辣豐3號、韓劍和單身天鷹5個抗病品種，韓育特大牛角椒、川優(yōu)801、春豐08-9等18個感病品種;其余品種因?yàn)榻臃N時期和栽培環(huán)境不同，其抗性類型發(fā)生變化，其中特大牛角王和豐辣長龍?jiān)谏�育前中期對疫病的抗性較強(qiáng)，仍具有較好的栽培價值。

　　以上結(jié)果可以為四川省辣椒品種的布局和更替、辣椒疫病防控策略的制定提供理論依據(jù)。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，隨著辣椒苗齡增加，其對疫病的抗性也增強(qiáng)(Reifschneideretal.，1986;Kim&Hwang，1992)。

　　本試驗(yàn)結(jié)果表明，辣椒在不同生育時期和不同環(huán)境中接種，發(fā)病情況顯著不同。室內(nèi)苗期接種苗齡為6～8片真葉期，結(jié)果表明抗病品種有5個，感病品種41個;大田接種時辣椒已經(jīng)分枝，莖稈明顯木質(zhì)化，表現(xiàn)高抗或抗病的品種增至16個，且有3個品種病情指數(shù)為0，表現(xiàn)感病的品種減至28個，辣椒的整體發(fā)病程度明顯變輕，這與Kim等(1989)的研究結(jié)果一致，即辣椒植株存在階段抗性，二次分枝時的抗性比6葉期時大大提高。同時，辣椒的發(fā)病進(jìn)程也明顯減緩，室內(nèi)苗期接種3d后，所有辣椒品種即穩(wěn)定發(fā)病，而大田接種13d后，有23個品種抗性等級提升，其中有3個品種未發(fā)病。

　　但是也有6個品種在田間接種后由苗期接種時的抗病或中抗變?yōu)楦胁�，這與Hartman和Wang(1992)關(guān)于Szechwan辣椒品系的研究結(jié)果相符，即該品系的幼齡和高齡植株比中齡植株病情指數(shù)低，例如本試驗(yàn)中的27號品種農(nóng)椒7號的階段抗性規(guī)律與之類似。楊明英等(2015)在不同生育期對4個已知抗性的辣椒品種進(jìn)行抗性鑒定，結(jié)果顯示在5～6片真葉期接種能有效區(qū)分品種間的抗性，且與品種自身真實(shí)抗性相符。

　　本試驗(yàn)中室內(nèi)苗期接種和大田接種與病圃試驗(yàn)的鑒定結(jié)果均呈極顯著正相關(guān)，兩者都可以在一定程度上代表辣椒在田間的真實(shí)抗性，但前者與病圃試驗(yàn)的相關(guān)系數(shù)大于后者，說明室內(nèi)苗期人工接種的鑒定結(jié)果能更準(zhǔn)確地反映辣椒在田間的真實(shí)抗性水平，且操作簡便，環(huán)境條件更易控制。

　　何烈干等(2014)對70份辣椒種質(zhì)進(jìn)行抗性研究，認(rèn)為朝天椒類種質(zhì)抗病性均較強(qiáng)，而甜椒或燈籠椒類種質(zhì)抗病性均較弱。赫衛(wèi)等(2018)對162份辣椒材料的疫病抗性和形態(tài)學(xué)特征的相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示抗病或中抗材料以長指形為主，感病材料以長牛角形和羊角形為主。

　　李屹和田曉麗(2012)認(rèn)為線椒材料的整體抗病性要強(qiáng)于牛角椒和羊角椒�？傮w而論，小果型品種比大果型品種抗病，本試驗(yàn)也印證了這一觀點(diǎn)。以室內(nèi)苗期接種的鑒定結(jié)果為例，抗病或中抗品種中線椒和朝天椒占比為66.67%，感病品種以羊角椒、牛角椒和燈籠椒等大果型辣椒為主，占比為53.66%。在辣椒結(jié)果期表現(xiàn)抗病的品種有7個，其中有6個品種為線椒或朝天椒。后續(xù)可以通過接種離體果實(shí)來驗(yàn)證果型和疫病抗性的相關(guān)性。

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　　何烈干，馬輝剛，陳學(xué)軍，方榮，周坤華，蘭波.2014.辣椒種質(zhì)疫病抗性鑒定及防治藥劑的篩選.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，36(5)：1054-1060.

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　　農(nóng)業(yè)方向刊物推薦：《山東農(nóng)業(yè)科學(xué)》是山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、山東農(nóng)學(xué)會、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)共同主辦的綜合性農(nóng)業(yè)科技期刊，創(chuàng)刊于1963年10月。